pcr实验室核酸提取流程（pcr实验室核酸提取流程视频）

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进入PCR实验室必须“全副武装” 新民晚报记者 徐程 摄（下同）

在过去的两天里，经过第一批“网格化”筛选的市民发现，一些社区已经重新进入了“决赛圈”，一些社区仍然存在风险，这延长了控制时间。一份核酸报告起着关键作用。

对公众来说，核酸检测似乎只有两个步骤：注册采样，等待几个小时后在健康云应用程序上查询结果。事实上，在这两个看似轻松的步骤背后，基因扩增实验室也被浓缩了（PCR实验室)检查人员的大量工作。

凌晨2点，这座城市的万家灯早已熄灭，而申城的核酸检测实验室依然灯火通明。一名穿着厚重防护服的检查员正在试验台前仔细检查核酸样本。汗水不停地从额头上冒出来，嘴里的热量模糊了护目镜。

采样后，你的标本经历了什么样的“奇幻漂流”之旅？新民晚报记者近日走进同济大学附属东方医院南医院检验科PCR实验室。吴文娟主任揭示了一份准确的核酸报告是如何诞生的？

图:待检测的核酸标本堆满了桌子

标本有“身份证”

“医生，我今天在你们医院做的核酸什么时候会有结果？要多长时间？”

“医生，我急需核酸报告。我能帮我快速检测吗？”

这几天，申城各医疗机构的医务人员总会接到这样的询问电话。许多人认为，核酸采样后，直接用机器检测很快就会产生结果。但事实上，自从采样护士在你的鼻子或喉咙里“慢慢扭曲”以来，后续还包括标本签收、核酸提取、核酸转移、核酸扩张、结果审核等步骤。

采集核酸检测样品后，采集人员会清点数量，用密封袋包装，用消毒剂喷洒消毒，然后放入标本转运箱，由专人送至核酸检测实验室。检查人员收到样品后，将首先对转运箱进行消毒，打开后对转运箱内壁和标本采集密封袋进行二次消毒，然后打开密封袋取出样品。

“核酸收集管上有条形码信息，签收人员应明确标本来自哪个社区或人群，是单采还是混采。吴文娟说：“此外，我们还将注意标本上的时间，以便将来需要时可追溯。”

之后，核酸标本将经历“幻想漂流”的第二步——拥有“身份证”！检查人员称这一步为“标本前处理”。“PCR反应是在96孔板上实现的，每个孔位都要有自己独特的身份。吴文娟说。

图:检查人员刚刚发送样本进行编号和信息输入

看似只是“前处理”，但防备之心却一点也不能放松。检查人员应识别空管或溢流的发生。特别是大人群10:1混采时，小试管被拭子挤满。一旦阳性标本溢出，一方面可能会造成其他标本结果的污染(假阳性)，另一方面对实验室的生物安全构成威胁——这也是PCR实验室检查员也要穿“大白”的原因——医用帽子。N95口罩、面屏、护目镜、医用防护服、隔离衣、一次性鞋套、两层手套，这些“约束”可以为检查人员创造最安全的环境。

此外，PCR实验室需要严格的分区，最好是负压实验室。

此外，PCR实验室需要严格的分区，最好是负压实验室。空气流动只会从外到内，因此实验室内的污染不会扩散到外部世界，从而确保实验室外的安全。

与病毒“擦肩而过”或只有2毫米

拿到“身份证”的核酸标本不能直接测试，要先提取核酸，扩大核酸。因此，核酸标本“幻想漂流”的下一站是PCR加样区——简单地说，检查人员应该“发现”病毒的遗传物质（核糖核酸）

此时，检查人员戴着双层手套，在生物安全柜内一管一管地拧开螺旋盖，手动吸收样品，加入核酸提取板孔，然后拧上螺旋盖，将标本放回原处。“重复操作的样本有多少次。吴文娟说。当时，检查人员与新冠肺炎“擦肩而过”的距离可能只有两层乳胶手套——2毫米，但核酸检测不允许他们害怕。

图:检验人员正在进行核酸提取过程中的加样步骤

获得核酸后，检查人员用移液枪将核酸转移到事先准备好的反应管中，形成反应系统，进入“幻想漂流”的下一站：扩大分析区。

“不能出错，不能遗漏，不能发生生物安全事故。可以说，检查人员总是处于高度紧张的状态。只要说“加样”，检查员就应该用极小的枪头将每个提取的核酸添加到试剂中，大约一滴水的四分之一，每一步都必须非常小心。吴文娟告诉记者，“我们迫切希望有一个打开盖子和样品的仪器来‘解放’检查员，但现有的仪器在速度上并不令人满意，只能手动操作。”

只有让它更多，才能检测出来

经过复杂耗时的早期制备过程，样本终于来到了“幻想漂流”的关键一站。样品的采样质量、核酸提取质量和结果将在这里看到。

在这里，我不得不提到获得诺贝尔奖的聚合酶链反应（PCR），这是20世纪80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它可以在几个小时内将目标基因片段扩展到数亿倍，成为当今生命科学研究中最重要、最广泛使用的技术手段之一。

如何理解扩增？如果从标本中提取的核酸被视为一块土地，新冠肺炎是一种种子，你怎么知道土地上是否有种子？简单的方法是加入一些水和肥料(试剂)，让种子一个变两个，两个变四个，四个变八个……“病毒是看不见的，微量标本也不容易检测到，所以检测起来更方便。吴文娟解释说。

图:PCR仪上的扩增检测只有经过复杂的前期制备工作才能进行。上机后，需要1.5小时左右的扩增检测，中间不能有停顿、停电、仪器故障，核酸检测可以完成

当反应管在机器上开始检查时，这意味着“弓没有回头箭”——从采样到核酸制备，任何缓解问题都可能导致返工和重测，从而使报告时间翻倍。

3月15日，国家卫生健康委发布了《新型冠状病毒诊疗方案(试行第九版)》。其中，该计划将解除隔离管理和出院标准修改为“N基因和ORF基因CT值连续两次新型冠状病毒核酸检测”≥35(荧光定量PCR方法，边界值为40，采样时间间隔至少为24小时)，这也让很多“小白”知道，这里的“CT不要去医院拍照CT，它指的是扩展的阈值。简单地说，“简单地说， CT值越低，阳性越强；CT值越高，阳性越弱。”

作为初筛实验室，只能向疾控中心报告“疑似阳性”。“我们将向相应地区的疾控部门报告CT值登记报告。然后根据疾控要求转移原管标本进行复核。吴文娟说，PCR实验室也会通过紫外线消毒。根据介绍，阴性标本通常储存一两天进行检查。

向你奔跑的报告背后是汗水

在这里，核酸标本的“奇幻漂流”之旅还没有结束。检测人员需要分析扩展结果：包括阴阳性质控制结果是否在控制、基线设置、逐孔分析标记、样品结果是否正常等。当阴阳性质控制全部满足检测要求时，排除假阴、假阳的可能性，及时审查异常结果样本，确保最终报告结果正确，并上传到健康云。

有人好奇，在健康云核酸结果查询中，“OFR1a/b阴性，N基因阴性是什么意思？吴文娟解释说，这是新型冠状病毒核酸的两个特异性片段。”一般来说，同一标本中的两个基因检测结果为阳性，判断为阳性，单基因阳性需要重新检查。”

图说:这几天，PCR实验室检查人员超负荷工作

“现在我们的实验室工作包括‘愿意检查和检查’——市民需要核酸阴性报告的‘通行证’；‘检查和检查’——住院患者和陪护人员，以及医院承担的密接、次密接和高风险人群的核酸检测。这几天，还有网格化筛选的任务。吴文娟的语气透露出疲劳。

仪器运行时，检测人员能轻松一段时间吗？不，这时，一批新的标本又来了，又要开始记录信息，提核酸，加样……吴文娟说，随着核酸样本量的增加，检验人员一直在超负荷运行。

“防护服不透气，全身盖在里面，刚穿上就会很热。此外，整个实验室在热量积累一天后会非常闷热，即使空调室内温度也会达到28-30℃。另外，实验室里的静电也很强，所以也很干燥。“我们中的许多人已经好几天没有回家了，每个人都是‘5’ 2’‘白 黑色的节奏在工作，能躺下休息一会儿，感觉很满足。”

新民晚报记者 郜阳